決明子中黃曲霉毒素含量檢測(cè)的免疫親和柱法
黃曲霉素簡(jiǎn)介
黃曲霉毒素(AFT)是一種毒性很強(qiáng)的肝毒素, 可引起肝臟的急慢性損害， 同時(shí)還對(duì)腎臟等其他多種組織器官造成影響, 并具有致癌、致畸、致細(xì)胞突變的作用。 ATF廣泛存在于玉米、麥類、稻谷等農(nóng)產(chǎn)品以及堅(jiān)果、花生和動(dòng)物飼料中，近年來(lái), 有陸續(xù)報(bào)道我國(guó)中草藥材上ATF污染也很嚴(yán)重,。
為此，我國(guó)不斷擴(kuò)大對(duì)中藥材中黃曲霉含量的檢測(cè)領(lǐng)域，并制定相關(guān)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)以加強(qiáng)對(duì)中藥材的質(zhì)量管控。
黃曲霉毒素總量的測(cè)試方法
實(shí)驗(yàn)耗材：黃曲霉總量免疫親和柱
參照標(biāo)準(zhǔn)：《中國(guó)藥典2015年版第四部》
實(shí)驗(yàn)部分
一、樣品提取
準(zhǔn)確稱取5.0 g粉碎后決明子樣品置于50mL離心管中，加入1 g氯化鈉，加入25 mL 70%甲醇溶液，于渦旋儀上渦旋2min，在5000 r/min下離心5min，取5 mL上清液，用水定容至20 mL，過(guò)濾，取10 mL待凈化。
二、免疫親和柱凈化
(1) 上樣：將20 mL上樣器連接于免疫親和柱上端，取待凈化液以1-2滴/秒的速度通過(guò)免疫親和柱，棄掉流出的液體。
(2) 淋洗和洗脫：用20 mL水淋洗柱子，分兩次淋洗，棄去流出的液體；抽干小柱；加入2×1 mL甲醇洗脫，抽干小柱，收集洗脫液。
(3) 重新溶解：洗脫液在45℃氮吹至近干，0.5 mL初始流動(dòng)相復(fù)溶，混勻，經(jīng)0.22 μm濾膜過(guò)濾，供上機(jī)測(cè)試。
三、儀器條件
儀器測(cè)試條件（僅供參考）
3.1 液相條件
| 儀 器：UPLC/MS/MS (Thermo Fiaher TSQ Endura ) | 進(jìn)樣量： 4 μL |
| 色譜柱：CommaSilTM HILIC(2.1mm×100 mm, 3 μm) | 柱 溫： 30 ℃ |
| 流動(dòng)相：A：10 mmol/L 乙酸銨溶液 B：乙腈 | 流 速： 0.3 mL/min |
表1 梯度洗脫
| 時(shí)間/min | A% | B% |
| 0 | 90 | 10 |
| 3 | 60 | 40 |
| 4.5 | 55 | 45 |
| 6.5 | 35 | 65 |
| 10 | 60 | 40 |
3.2質(zhì)譜條件
| 離子源：HESI，正離子監(jiān)測(cè) | 電噴霧電壓：3500 V |
| 鞘氣壓力：2 arb | 輔氣壓力： 1 arb |
| 離子傳輸管：275℃ | 輔氣溫度：350℃ |
| 采集方式： 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(SIR) |
四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
表2. 決明子中0.02 mg/kg黃曲霉B1,黃曲霉G1和0.007mg/kg黃曲霉B2,黃曲霉G2的添加回收結(jié)果
1決明子中的黃曲霉B1
2決明子中的黃曲霉 B2
3決明子中的黃曲霉G1
4決明子中的黃曲霉G2
