決明子中黃曲霉毒素含量檢測的免疫親和柱法

黃曲霉素簡介

黃曲霉毒素(AFT)是一種毒性很強(qiáng)的肝毒素, 可引起肝臟的急慢性損害， 同時還對腎臟等其他多種組織器官造成影響, 并具有致癌、致畸、致細(xì)胞突變的作用。 ATF廣泛存在于玉米、麥類、稻谷等農(nóng)產(chǎn)品以及堅果、花生和動物飼料中，近年來, 有陸續(xù)報道我國中草藥材上ATF污染也很嚴(yán)重,。

為此，我國不斷擴(kuò)大對中藥材中黃曲霉含量的檢測領(lǐng)域，并制定相關(guān)檢測標(biāo)準(zhǔn)以加強(qiáng)對中藥材的質(zhì)量管控。

黃曲霉毒素總量的測試方法

實(shí)驗耗材：黃曲霉總量免疫親和柱

參照標(biāo)準(zhǔn)：《中國藥典2015年版第四部》

實(shí)驗部分

一、樣品提取

準(zhǔn)確稱取5.0 g粉碎后決明子樣品置于50mL離心管中，加入1 g氯化鈉，加入25 mL 70%甲醇溶液，于渦旋儀上渦旋2min，在5000 r/min下離心5min，取5 mL上清液，用水定容至20 mL，過濾，取10 mL待凈化。

二、免疫親和柱凈化

(1) 上樣：將20 mL上樣器連接于免疫親和柱上端，取待凈化液以1-2滴/秒的速度通過免疫親和柱，棄掉流出的液體。

(2) 淋洗和洗脫：用20 mL水淋洗柱子，分兩次淋洗，棄去流出的液體；抽干小柱；加入2×1 mL甲醇洗脫，抽干小柱，收集洗脫液。

(3) 重新溶解：洗脫液在45℃氮吹至近干，0.5 mL初始流動相復(fù)溶，混勻，經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，供上機(jī)測試。

三、儀器條件

儀器測試條件（僅供參考）

3.1 液相條件

儀 器：UPLC/MS/MS (Thermo Fiaher TSQ Endura )	進(jìn)樣量： 4 μL
色譜柱：CommaSilTM HILIC(2.1mm×100 mm, 3 μm)	柱 溫： 30 ℃
流動相：A：10 mmol/L 乙酸銨溶液 B：乙腈	流 速： 0.3 mL/min

表1 梯度洗脫

時間/min	A%	B%
0	90	10
3	60	40
4.5	55	45
6.5	35	65
10	60	40

3.2質(zhì)譜條件

離子源：HESI，正離子監(jiān)測	電噴霧電壓：3500 V
鞘氣壓力：2 arb	輔氣壓力： 1 arb
離子傳輸管：275℃	輔氣溫度：350℃
采集方式： 多反應(yīng)監(jiān)測(SIR)

四、實(shí)驗結(jié)果

表2. 決明子中0.02 mg/kg黃曲霉B1,黃曲霉G1和0.007mg/kg黃曲霉B2,黃曲霉G2的添加回收結(jié)果

1決明子中的黃曲霉B1

2決明子中的黃曲霉 B2

3決明子中的黃曲霉G1

4決明子中的黃曲霉G2