銀杏提取物中山奈酚和異鼠李素的固相萃取方法(HLB固相萃取柱)
山奈酚介紹
山奈酚屬于黃酮類化合物，廣泛存在于各種水果、蔬菜及飲料中，因其具有防癌、抗癌、抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒等多種功效。
異鼠李素介紹
異鼠李素(Isorhamnetin，Iso)是從銀杏、沙棘等藥用植物中分離提純的黃酮類化合物，亦廣泛存在于其他多種植物的花、果實(shí)和葉中。有較好的抗腫瘤、抗心肌缺氧、缺血，緩解心絞痛，抗心律失常，治療冠心病和高血壓，降低血清膽固醇，保護(hù)心血管，促進(jìn)血流通暢等多種生物學(xué)效應(yīng)，廣泛應(yīng)用于臨床。
一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/h2>
本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測銀杏提取物中山奈酚和異鼠李素的殘留。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機(jī)溶劑的使用，操作簡便。
二、實(shí)驗(yàn)?zāi)繕?biāo)物
山奈酚(CAS: 520-18-3)、異鼠李素(CAS: 480-19-3)。
三、應(yīng)用范圍
本方法適用于銀杏提取物中山奈酚和異鼠李素殘留的HPLC檢測及確證。
四、實(shí)驗(yàn)材料
HLB 30 mg/1 mL
五、實(shí)驗(yàn)方法
1、樣品提取
準(zhǔn)確稱取0.5 g銀杏提取物膠囊置于50 mL離心管中，用70 %甲醇水定容至20 mL，于振蕩器振蕩提取30 min，取0.5 mL溶液到另一個50 mL離心管中，用水定容至20 mL，振蕩混勻，溶液備用。
2、SPE柱凈化
(1)活化：HLB使用前用1 mL甲醇活化，1 mL水平衡。
(2)上樣和洗脫：取1 mL備用液過柱，棄去流出液；用1 mL 5 %甲醇水淋洗，棄去流出液，抽干小柱；用2 mL甲醇洗脫，收集洗脫液。（整個上樣、洗脫過程控制流速在1 mL/min內(nèi)）。
(3)上機(jī)測試：取洗脫液1 mL經(jīng)0.22 μm濾膜過濾，供上機(jī)測試。
3、HPLC條件
設(shè)備：Waters Alliance 2695
色譜柱：InertSustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm)
檢測器：Waters 2996 紫外檢測器
檢測波長：363 nm
等度洗脫：甲醇 ：0.1 %甲酸水溶液=70：30
流速：1.0 mL/min
進(jìn)樣體積：20 μL
六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
1、10.0 mg/kg銀杏提取物基質(zhì)中山奈酚和異鼠李素的添加回收結(jié)果
表1 10.0 mg/kg銀杏提取物基質(zhì)中山奈酚和異鼠李素的添加回收結(jié)果
2、山奈酚和異鼠李素檢測的液相色譜圖
圖1 添加水平為10.0 mg/kg山奈酚檢測的液相色譜圖
圖2 添加水平為10.0 mg/kg異鼠李素檢測的液相色譜圖
