牛奶中五氯酚殘留量檢測的固相萃取方法 (MAX)

一、實驗目的

本研究利用固相萃取法作為樣品的前處理方法，HPLC法作為分析方法，檢測牛奶中五氯酚殘留量的含量。該方法可簡化樣品的前處理過程，節(jié)省有機溶劑的使用，操作簡便。

二、實驗目標物

五氯酚鈉

三、參考標準

《GB 23200.92-2016 食品安全國家標準 動物源性食品中五氯酚殘留量的測定 液相色譜-質譜法》

四、實驗材料

 MAX 60mg/3ml

五、實驗方法

1、樣品提取

準確稱取牛奶樣品2.0 g，加入10 mL 5%三乙胺的乙腈-水（7:3,v/v）溶液，渦旋混合1 min，超聲提取5 min，5000 r/min離心5 min，取上清液待凈化。

2、SPE凈化

(1)活化：固相萃取柱使用前依次用5 mL甲醇、5 mL 水活化。

(2)上樣和洗脫：往固相萃取柱中加入待凈化液；依次加入5 mL 5%氨水溶液、5mL甲醇、5mL 2%甲酸的甲醇-水（取4%甲酸甲醇溶液與水等體積混勻）溶液淋洗，棄去流出液；抽干小柱，再加入4 mL 4%甲酸甲醇溶液洗脫，收洗脫液。

(3)重新溶解：洗脫液與40℃氮吹至近干，用1 mL流動相定容，混勻，過0.45um有機微濾膜，供HPLC測試。

3、HPLC條件

設備：Waters Alliance 2695

色譜柱：InertSustain-C18 (4.6 mm×250 mm, 5μm)

檢測器：Waters 2996 DAD檢測器

檢測波長：300 nm

流動相：A：乙腈  B：0.1%磷酸水

洗脫方式：等度洗脫，A:B=75:25

流速：1.0 mL/min

進樣體積：20 μL

六、實驗結果

1、 0.5 mg/kg牛奶中五氯酚的添加回收結果

表1  0.5 mg/kg牛奶中五氯酚的添加回收結果

2、 添加水平為 0.5 mg/kg牛奶中五氯酚檢測的液相色譜圖

圖1  添加水平為 0.5 mg/kg牛奶中五氯酚檢測的液相色譜圖